2
گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس
3
گروه انگلشناسی، انستیتوپاستور ایران
چکیده
مقدمه و هدف: لیپوآرابینومان مانوزیله (ManLAM) از آنتیژنهای گلیکولیپیدی است که درصد قابل توجهی از دیواره سلولی باکتری مایکوباکتریوم بویس ب ث ژ را تشکیل میدهد. نظر به اینکه تولید آنتیبادی منوکلونال آن، بهویژه در طراحی کیت تشخیص سریع بیماری سل کاربردهایی فراوان دارد، لذا هدف از تحقیق حاضر، تولید آنتی بادی منوکلونال ضد این آنتیژن میباشد. مواد و روش کار: پس از تزریقهای منظم موشهای BALB/c با BCG سونیکیتشده، آنتیژن LAM، تیتر آنتیبادی تولیدشده بررسیگردید. لنفوسیتهای طحالی موشها و سلولهای میلومای Sp2/0 با کمک پلیاتیلنگلیکول امتزاجدادهشدند. سلولها در محیط HAT انتخابشدند و کلونهای مولد آنتیبادی ضد آنتیژن LAM با استفاده از آزمون الایزا شناساییشدند؛ پس از تخلیص آنتیبادی منوکلونال، شناسایی آنتیژنهای لیپوآرابینومان مانوزیله و BCG سونیکیتشده با روش وسترن بلاتینگ انجامگرفت. نتایج: تعداد2 کلون H2-3B9 , H1-3D3 مولدآنتیبادی اختصاصی با جذب بالا در آزمایش الایزا، انتخابشدند. نتایج وسترن بلاتینگ، باند30 کیلو دالتونی مربوط به آنتیژنهای لیپوآرابینومان مانوزیله و BCG سونیکیتشده با استفاده از آنتیبادیهای منوکلونال IgM و IgG3 را تأییدمیکرد. نتیجهگیری: نتایج نشانداد که امکان تولید و تخلیص آنتیبادی منوکلونال با استفاده از امتزاج لنفوسیتهای B طحال موشهای ایمنشده و سلولهای میلوما وجودداشته، تأیید واکنش اختصاصی آنتیبادی مذکور قبل از انجام مطالعات تشخیصی در شناسایی سریع سل در ادرار بیماران و بررسیهای مصونیتزایی واکسن ب ث ژ مورد توجه خواهدبود.
)