مقدمه و هدف: توکسوپلاسموزیس بهوسیله یک انگل تکیاخته داخل سلولی (توکسوپلاسما گوندهای) ایجاد میشود و در سراسر جهان گسترش دارد. این بیماری دارای اهمیت عمده پزشکی و دامپزشکی است و عامل بیماری مادرزادی در انسان و حیوانات اهلی است. علاوه بر این، بهتازگی بهدلیل آنسفالیت در افراد ایدزی به اهمیت آن افزوده شده است. به همین دلیل تهیه یک واکسن مؤثر علیه توکسوپلاسما یک هدف مهم در جهان است. آنتیژن گرانولی 4 (GRA4) بهعنوان یک آنتیژن عمده توکسوپلاسما گوندهای شناخته شده است. از اینرو، بهعنوان یک کاندیدا برای تهیه واکسن ملاحظه شده است. آنتیژن گرانولی 4 از برادیزوئیتها و تاکیزوئیتها ترشح میشود. این ژن بهصورت کپی تک و فاقد اینترون است. هدف از این تحقیق، تهیه پلاسمید نوترکیب حاوی ژن GRA4 است که بتوان از آن به عنوان DNA واکسن استفاده کرد.
مواد و روش کار: در این تحقیق ژن GRA4 پس از تکثیر به روش PCR در پلاسمید pTZ57R کلون شد. سپس در باکتری اشرشیاکلی سوش TG1 ترانسفورم شد. پلاسمید نوترکیب پس از تکثیر از باکتری میزبان استخراج و ژن هدف با استفاده از برش آنزیمی، با آنزیمهای KpnI و EcoRI از پلاسمید pTZ57Rجدا شد. از طرف دیگر پلاسمید pcDNA3 برای پذیرش قطعه GRA4 و انجام کلونینگ نیز با آنزیمهای KpnI و EcoRI برش داده شد. GRA4 درون پلاسمید pcDNA3 سابکلون شد و این محصول واکنش اتصال در باکتریهای فوق ترانسفورم شده و در محیط LB حاوی آمپیسیلین کشت داده شدند؛ پلاسمیدهای نوترکیب pcGRA4 بهوسیله کیت استخراج پلاسمید، از اشرشیاکلی تخلیص شدند.
نتایج: صحت کار با روشهای PCR و برش آنزیمی به کمک آنزیمهای اختصاصی فوق با استفاده از الکتروفورز تأیید شده و نتایج نشان داد، قطعه GRA4 در پلاسمید pcDNA3 کلونشده است و باند حدود 1058 جفت بازروی ژل آگاروز ایجادشده بود که هماندازه ژن GRA4 توکسوپلاسما گوندهای است و تأیید نهایی با استفاده از توالییابی انجام شد.
نتیجهگیری: نتایج حاصل نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم قطعه GRA4 در پلاسمید pcDNA3 با موفقیت انجام شده است.
)