کلونینگ مولکولی ساب‏یونیت‌های آلفا و بتای هورمون لوتئینیزه با استفاده از توالیIRES در شاتل وکتورPEGFP-N1 و تطابق آن با بانک ژنی

نویسندگان

1 دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی

2 دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز

3 دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایلام

چکیده

مقدمه و هدف:هورمون‌های گلیکوپروتئینی ترشح‏شده از هیپوفیز قدامی از دو زیرواحد آلفا و بتا با اتصال غیرکوالان تشکیل‏شده‏است، زیرواحد الفا در هورمون‌های این خانواده یکسان است و تفاوت در فعالیت بیولوژیک این دسته ازهورمون‌ها به زیرواحد بتای آنها ارتباط‏دارد. با توجه به عدم دسترسی مناسب به هورمون و امکان ایجاد آلودگی، در این تحقیق تلاش‏شد تا با استفاده از توالیIRES زیرواحدهای آلفا و بتای این ژن به‏منظور استفاده درمانی، در پلاسمید بیانی pEGFP-N1کلون شود. مواد و روش‌ها:تحقیق با طراحی تجربی انجام‏گرفت،به‏منظور کلونینگ زیرواحدهای آلفا و بتای هورمون LH، ابتدا توالی نوکلوتیدی طراحی‏شده در پلاسمید حاملpGEM-BIسنتز شد. توالی مورد نظر در سایت SmaI پلاسمیدبیانی pEGFP-N1،ساب‏کلون شد. پلاسمید حاصل باانجام هضم آنزیمی و PCR،مورد تأیید قرارگرفت. نتایج:آنالیزآنزیمیو PCRنشان‏داد که پلاسمید-α-IRES-β pEGFP-Nl، حاوی توالی صحیحی بوده، با توالی ژن مورد نظر در بانک ژن تطابق‏دارد. نتیجه‏گیری:اینپلاسمیدبهدلیلساختارصحیحبرایانتقالبهسیستمیوکاریوتیوارزیابیبیان،مناسب است.

کلیدواژه‌ها