مقدمه: تداخل ( RNAi) RNA نوعی پدیده خاموشی ژن است که در آن RNA دو رشتهای ( dsRNA ) با تخریب مؤثر mRNA به طور اختصاصی، از بیان ژن جلوگیری میکند. واسطه این تخریب، RNA های تداخلگر کوچک ( siRNA) 21-23 نوکلئوتیدی هستند. نشان داده شدهاست که استفاده از siRNA بهعنوان ممانعتکننده بیان ژن، روشی مؤثر برای مطالعه عملکرد ژن در سلولهای پستانداران است. هدف: بررسی قابلیت siRNA برای خاموشی ژن eGFP در سلول بنیادی کارسینومای جنینی ( EC) ، P19 . مواد و روشها: در این مطالعه از نوعی سیستم بیانکننده siRNA بر اساس وکتوری به نام pSUPER استفاده شد که قادر به القای RNAi در سلول پستاندار (دودمان P19 ، سلول بنیادی کارسینومای جنینی موش) است. این وکتور قادر به بیان RNA سنجاق سر کوچکی ( shRNA ) است که نوعی ژن گزارشگر برونزاد به نام eGFP را مورد هدف قرار میدهد. بیان eGFP در سلول با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت و فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: با استفاده از پروتئین eGFP بهعنوان ژن گزارشگر، نشان داده شد که وکتور بیانکننده siRNA میتواند به طور اختصاصی بیان ژن eGFP را مهار کند. انتقال این پلاسمید به سلولهای P19 به طور قابل توجهی تعداد سلولهای بیانکننده eGFP و خاصیت فلورسنتی آنها را کاهش داد. اثر تداخل RNA در هر دو نوع ترانسفکت سلولی موقت و پایدار به طور موفقیتآمیز مشاهده شد. نتیجهگیری: نتایج نشان میدهد که استفاده از وکتور بیانکننده siRNA سنجاق سری به منظور RNAi روش امیدبخشی برای مهار بیان ژن در سلولهای پستانداران است.
)